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节段型白癜风皮损区角朊细胞表达碱性成纤维细胞生长因子的观察

2020-08-07 05:51:04 

节段型白癜风皮损区角朊细胞表达碱性成纤维细胞生长因子的观察

中华皮肤科杂志 1998年第4期第31卷 论著摘要

作者:徐小珂 李魏 刘荣卿 叶庆佾

单位:400038 重庆第三军医大学西南医院皮肤科[徐小珂(现在成都军区昆明总医院皮肤科 650032) 刘荣卿 叶庆佾];第三军医大学组胚教研室(李魏)

近年体外研究发现角朊细胞(KC)能产生多种影响黑素细胞(MC)增殖、黑素形成、形态、分化及其存活的细胞因子[1],其中以碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)、内皮素-1(ET-1)和干细胞因子(SCF)最为重要。Halaban等的体外研究证实[2],来源于KC的bFGF是正常MC的自然生长因子。白癜风的基本病理改变是表皮内的MC减少或消失,其发生的确切原因仍不清楚。了解KC所分泌的细胞因子bFGF在不同病期节段型白癜风皮损处KC的表达状况,为判断MC自体移植治疗白癜风后白斑区MC的转归提供一定的实验依据以及进一步认识该病的发生机制,均有一定意义。为此,本实验采用原位杂交的方法,在分子水平观察了节段型白癜风皮损区KC表达细胞因子bFGF的状况。

一、材料和方法

(一)病例:胸背部节段型白癜风患者17例,男11例,女6例;年龄16~38岁;病程6个月至15年,平均7.5年;其中活动期8例,稳定期9例;取材部位为白斑与正常皮肤交界处的白斑皮肤。患者分型、分期参照全国色素病学组修定的白癜风临床分型及疗效标准进行[3]。正常人对照采用胸背皮肤,共8例,男3例,女5例;年龄21~40岁。所有标本取材后立即放入液氮冻存备用。

(二)原位杂交:

1.探针的标记及原位杂交:0.8kb的bFGF cDNA裸探针由美国Abraham博士惠赠。采用地高辛DNA标记及检测试剂盒标记(德国宝灵曼公司),标记过程按试剂盒规定步骤进行;原位杂交参照文献[4]进行。

2.阴性对照:设置三种[4]:①以不加探针的杂交液进行杂交;②切片在杂交前用RNase处理,以降解细胞内所有的RNA;③先用等量的未标记探针杂交后再用标记探针杂交。

3.结果判断:在排除非特异性染色的情况下,原位杂交以胞浆内出现淡蓝色颗粒为阳性,典型的呈“月牙”状,每张切片在400倍镜下随机选择10个视野,计数每个视野中的阳性细胞,每例计数10张切片,取其平均值,作为该例标本的原位杂交阳性数。

(三)统计学处理:实验结果用t检验进行统计学分析。

二、结果

正常人皮肤组织可见细胞内bFGF的mRNA表达,其分布主要为表皮内的KC、真皮内的成纤维细胞,表皮内表达bFGF mRNA的KC主要分布在基底细胞层和棘细胞层。在皮损处,阳性细胞主要分布于棘细胞层和颗粒层,真皮内阳性细胞与正常人对照间未见显著性差异。各组阳性角朊细胞平均数分别是:正常人表皮13.6±5.3,稳定期白癜风10.2±4.4,活动期6.7±3.9。稳定期白斑区KC的分布和其阳性细胞数与正常人皮肤间无显著性差异,而活动期白斑区KC的阳性细胞数则低于正常人对照(P<0.05),阴性对照所采用的3种阴性对照方法结果均为阴性。

三、讨论

既往观察bFGF mRNA的表达多在培养细胞中进行,已发现培养的KC、成纤维细胞和内皮细胞均能表达该因子的mRNA[1,5],在组织原位中的观察报道较少。1991年Scott等[6]报道用同位素标记bFGF的RNA探针对正常皮肤进行原位杂交,首次证实了体外实验的发现,即皮肤组织内KC、成纤维细胞和内皮细胞表达bFGF,他们的实验观察到,正常表皮内从基底层至颗粒层细胞几乎全有密集的表达信号,各层之间的信号强弱无区别,真皮内成纤维细胞和内皮细胞的表达信号散在分布且强弱不一。从我们的实验结果看,正常人表皮内并非所有的细胞表达bFGF,而仅有少部分基底层和棘层细胞有表达信号;真皮内可见散在阳性细胞,从分布和形态上可以确定是成纤维细胞和内皮细胞,但阳性细胞数也远低于Scott等的报道,上述差异出现的原因可能与所用探针性质和杂交方法不同有关。

对白斑区皮肤的杂交发现,稳定期皮损KC表达的阳性细胞数及其分布与正常人皮肤间无显著性差异,而活动期皮损KC的表达阳性细胞数则低于对照;从阳性细胞的分布看,活动期皮损表皮内表达bFGF mRNA的KC多位于棘层和颗粒层,其原因不清,是否由于MC的消失,使细胞间的相互调控作用发生变化所引起,还有待于进一步研究。真皮内的阳性细胞数病变组与对照组之间未见明显差异。

本研究首次观察了节段型白癜风皮损处KC表达bFGF的状况,结果提示:bFGF作为MC最为重要的自然促分裂因子,在节段型稳定期皮损内正常表达,在活动期皮损内表达明显减弱,为MC自身移植治疗该型稳定期白癜风提供了MC能在移植部位长期存活的实验依据。

参 考 文 献

1 徐小珂综述. 角朊细胞对黑素细胞生物学性状影响的研究现状.国外医学皮肤性病学分册, 1995,21∶331-334.

2 Halaban R, Langdon R, Birahall N, et al. Basic fibroblast growth factorfrom human keratinocytes is a natural mitogen for melanocytes. J Cell Biol, 1988,107∶1611-1619.

3 全国中西医结合皮肤性病学会色素病学组. 白癜风临床分型及疗效标准(草案).中华皮肤科杂志, 1995,28∶212.

4 蔡文琴, 王伯?. 实用免疫细胞化学与核酸分子杂交技术. 第一版. 成都: 四川科学技术出版社, 1994.413-414.

5 Folkman J, Klagsbrun M. Angiogenic factors. Science, 1987,235∶442-447.

6 Scott G, Stoler M, Sarkar S, et al. Localization of basic fibroblast growth factor mRNA in melanocytic lesions by in situ hybridization. J Invest Dermatol, 1991,96∶318-322.

中华医学会皮肤科学会科研基金资助课题

(收稿:1997-08-08修回:1997-12-30)

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